为了获得有关肺癌组织中肿瘤细胞与免疫细胞相互作用的空间信息，研究人员使用KP 小鼠肺癌模型（Kras/Trp53 突变）通过呼吸道模拟肿瘤发生，然后让这些小鼠接受免疫治疗。 发病六至九周后，对肿瘤组织进行切片，然后进行HE染色、原位mRNA杂交和循环免疫荧光（CyCIF）分析。其中，HE图像可以提供肿瘤结节位置和正常组织解剖（包括气管和血管）的数据。
在CyCIF分析中，研究人员将肿瘤组织细胞分离成单个细胞，并利用单个细胞相对于肿瘤结节、肿瘤边缘和血管形成细胞网络的距离来量化单个细胞的染色强度。
为了让免疫细胞更有效地攻击肿瘤，作者将鸡卵清蛋白SIINFEKL（SIIN）和合成肽SIYRYYGL（SIY）两种抗原注射到肿瘤细胞中，注射抗原后的肿瘤模型称为LucOS。LucOS含有多种淋巴细胞的类型（如中性粒细胞、T 细胞和B 细胞）。
在分析LucOS 中不同类型的淋巴细胞时，研究人员发现这些淋巴细胞共存，为了进一步探索这些细胞之间的相互作用，研究人员使用了一种称为“VisinIT(http://www.maoyihang.com/sell/l_25/)y”的方法，可以交互量化组织切片中细胞的空间排列。
至于Visinity方法，这里举个例子，把一个蜂窝网络想象成一个公园，如果我们想知道里面人与人之间的关系，那么我们需要设置距离范围为50米，用不同的颜色来表示不同的这个范围内的人。然后写下他们周围的人的类型，当相似类型的人聚集在一起时，将这些人聚集在一起形成小组。
在这项工作中，研究人员检查了正常肺组织和LucOS 中的260 万个细胞，发现淋巴细胞主要聚集在正常组织和肿瘤组织的交界处。这些淋巴细胞主要是T细胞和B细胞。
通过分析它们的空间结构，研究人员发现了一个通过细胞间直接接触连接起来的淋巴网络，其中T细胞和B细胞占50%以上，T细胞和B细胞的比例与淋巴结的大小有关.淋巴网络中，较小的淋巴网络包含较多的T 细胞，较大的淋巴网络包含较多的B 细胞。
在分析淋巴网络的大小和组成后，研究人员发现淋巴网络的主要成员是T 细胞，它们通过募集B 细胞来扩大自己的队伍。此外，淋巴网周围还存在一些CD103+树突状细胞，为淋巴网的形成提供了支持。
我们知道，T细胞之所以能够靶向肿瘤，与其表面的趋化因子受体CXCR3密不可分。 CXCR3可识别并结合CXCL9、CXCL10和CXCL11等趋化因子，增强免疫反应。
因此，研究人员提出，T 细胞淋巴网络与趋化因子的表达之间一定存在联系。进一步分析显示，在LucOS肺癌组织中，CXCL9和CXCL10 mRNA表达增加，淋巴网络形成与CXCL9和CXCL10+细胞之间的距离呈负相关。换句话说，T细胞越接近CXCL9和CXCL10+细胞，就越容易形成淋巴网络。
接下来，研究人员想知道淋巴网络在对抗肿瘤中扮演什么角色。研究人员随后研究了接种癌症疫苗（针对SIIN 和SIY 抗原的治疗性疫苗）和PD-1/CTLA-4 免疫检查点(ICB) 抑制剂的小鼠肿瘤组织中的T 细胞变化。结果观察到三种不同形态的CD8+ T细胞，即表达TCF1+PD-1+的原始CD8+ T细胞、具有强细胞毒性的CD8+ T细胞和处于疲劳状态的CD8+ T细胞。
之前的研究表明，TCF1+PD-1+ 幼稚CD8+ T 细胞可以增强ICB 在小鼠和人类中的治疗效果。在这篇文章中，研究人员还注意到，经过ICB治疗后，淋巴网络中产生了更多的CD8+ T细胞，抗肿瘤作用增强。研究人员认为，在ICB 治疗过程中，淋巴网络保留了CD8+ T 细胞的原有特征，并帮助原始CD8+ T 细胞TCF1+PD-1+ 分化为更具杀伤力的CD8+ T 细胞。
最后，作者测试了这些现象是否存在于人类肺癌组织中。结果。在早期肺腺癌中也发现了富含TCF1+PD-1+原始CD8+T细胞的淋巴网络，淋巴网络也可能为CD8+T细胞攻击肿瘤提供了有利的空间环境。
本研究揭示了肿瘤中免疫细胞的空间排列，其中T细胞和B细胞形成淋巴网络，为T细胞攻击肿瘤提供了有利条件，增强了免疫反应。
