研究者采用了两种肿瘤再生模型，一种是基于最小肿瘤细胞群的应用，另一种是条件培养基(CM)的应用。他们利用atp -琼脂糖亲和层析法和免疫沉淀法来消耗Hsp70的CMs。通过MTT法和xCELLigence技术检测细胞增殖和细胞生长动态，采用qPCR和ELISA法检测前列腺素E，并估计细胞生长标志物。此外，他们还采用免疫沉淀法和质谱法鉴定hsp70结合蛋白，并建立蛋白相互作用分析来揭示上述蛋白复合物。
研究发现，死亡肿瘤细胞的CM中含有肿瘤再生启动因子，而去除其中的一种Hsp70会导致复发激活能力降低。单独使用atp -琼脂糖去除Hsp70对再生没有影响，而免疫消耗Hsp70则显著降低其再生活性。利用蛋白质组学和免疫化学(http://www.maoyihang.com/sell/l_9/)方法，研究者发现Hsp70在条件培养基中结合并结合另一个丰富的警报蛋白，高迁移率组B1 (HMGB1)蛋白；这种复合物在抗癌药物治疗的肿瘤细胞中形成，持续存在于细胞质中，并进一步从垂死的肿瘤细胞中释放出来。增殖标志物Ki67、Aurka和MCM-10的表达增强，前列腺素E的产生和自噬激活的增加，证明了Hsp70-HMGB1复合体的复发激活能力。
综上所述，两个具有明显促肿瘤活性的蛋白Hsp70和HMGB1在细胞中形成复合物，受到化疗并被释放到细胞外空间，引发一小部分癌细胞的增殖。在肿瘤复发的细胞和动物模型中，能够分裂该复合物的化合物抑制肿瘤再生，证明这两个警报器之间的相互作用可能是肿瘤复发的标志，并且给予Hsp70抑制剂可能成为避免肿瘤复发风险的额外工具(http://www.maoyihang.com/sell/l_5/)。
